中醫濕證動物模型的研究進展

　　摘要：濕，屬六氣之一。濕證是指具有濕之特性的各種不同證候。近年來，濕證是中醫證候研究的熱點和重點具有重要的科學研究價值，證候的構建是中醫與現代醫學的橋梁和紐帶。構建能客觀體現及反映濕證的動物模型是進一步開展臨床和基礎研究的立足點。目前，已有很多的中醫濕證實驗室研究報道，尤其在各種中醫濕證動物模型的構建及相關指標的檢測。本文將綜述中醫濕證的理論源流、濕證動物模型分類及濕證模型檢測指標及意義的研究進展進行探討，為中醫濕證動物模型的建立及優化研究提供參考及啟示，以期為濕證動物模型的構建及濕證生物學機制研究提供思路。

　　關鍵詞：中醫，濕證;濕證動物;動物模型;模型;研究;研究進展

　　濕證的產生，可以外來也可內生。外來因素包括：居住卑濕及霧露雨濕等，內生因素包括多食生冷及酒酪之品。不論內濕及外濕，皆是脾氣虛弱以后，濕邪乘虛而入所致。濕邪作為重要的致病因素，歷代醫家對其致病機制的理解亦逐步加深。目前現存最早關于濕邪致病的記載可追溯到戰國時期的醫籍《五十二病方》，其嬰兒索痙篇中載有“索痙者，如產時居濕地久”表明生產時感受濕邪可致索痙病。

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　　《皇帝內經》進一步豐富了對濕邪致病的認識，其中《素問生氣通天論篇第三》載“因于濕,首如裹”。濕證之治療，《時病論》中倪松亭云：治濕之道非一，當細察而藥之。濕在皮膚常見病證為脾虛濕蘊，脾虛濕蘊證即飲食不節或稟賦不耐，蘊于肌膚所表現出來的皮損，大便稀溏，舌淡，苔白，脈細滑一類病證，本病證見于蛇串瘡、嬰兒濕疹特應性濕疹、黧黑斑、濕瘡。

　　寒濕之邪乘虛而入，阻滯經絡，流注關節、肌肉，致使氣血不通，不通則痛;寒濕為陰邪，故四肢疼痛、沉重、乏力。中醫認為，風寒濕合而為痹，造成風濕性關節炎、類風濕關節炎等。正如《丹溪心法中濕》所載“濕之為病，有自外入者，有自內出者”，濕邪分為內濕和外濕而致病。吳鞠通《溫病條辨濕》有言“脾主濕土之質，為受濕之區，故中焦濕癥最多”說明內濕主要由于脾胃失司所致，外濕則由外界環境水濕之邪所致，內濕與外濕二者不能完全區分，往往相互引動而致病。

　　濕證動物模型分類及其造模方法中醫濕證的理論方法及臨床經驗需要運用現代醫學方法來進行探討及研究，故采用合適的動物模型，尤其是建立標準化中醫證候(濕證)動物模型是推動中醫證候研究的重要環節。中醫證候的動物模型應以中醫理論為指導、構建的模型癥狀應符合中醫臨床癥狀、具有可重復及穩定性為基本原則。此外，也可用相應的藥物干預進行反證治療。目前，已有中醫證候模型構建的文獻報道，包括模型的建立方法、條件及檢測指標進行了相關的研究，現將該方面的研究進展綜述如下。

　　1.1內濕證動物模型

　　1.1.1脾虛濕阻模型陳浩等[1]用復合造模方法構建了脾虛濕阻型大鼠模型，具體方法為：先以高脂飼料(含30%蛋白、10%含高膽固醇的動物油脂、10%膽固醇、1%膽鹽)喂養SD大鼠周，第天開始每日在飼養高脂飼料的基礎上給予每只大鼠4ml冰糖水灌胃(分次，每次2ml)，每日讓大鼠游泳次至耐力極限，其中冰糖灌胃共16天，游泳21天，造模時間共48天。

　　趙文曉等[25]及劉嘉琪等[6]的研究通過每日給予大鼠高脂低蛋白飼料和力竭游泳相結合的方法構建了成功的脾虛濕困大鼠模型。具體操作方法為：模型組及各藥物組給予特制的高脂低蛋白飼料(AIN純化飼料基礎上減少酪蛋白含量,增加豬油和膽固醇制成),每天下午尾部以10%體質量負重游泳,入水游至力竭即鼻尖沒入水中10s停止,誘導周，造模時間共周。李堯[7]用苦寒瀉下聯合饑飽失常方法構建了脾虛濕困大鼠模型，其具體造模方法為：每日早晚給大鼠灌胃大黃水煎液約2ml(2ml·100g·d),隔天禁食，飲水自由，造模時間共14天。

　　1.1.2脾虛水濕不化模型

　　王彥芳等[8]依據中醫勞倦聯合飲食傷脾理論成功構建了脾虛水濕不化大鼠模型，具體造模步驟為：每日下午將大鼠放入溫度約為20℃±2℃、深約50cm的水中游泳，游泳時以10%體重尾部負重，游泳至鼻尖淹沒入10s時表明大鼠已精疲力竭即停止游泳。造模期間以高脂低蛋白飼料具體成分:15%豬油，5%玉米油，0.2%氯化膽堿，15%淀粉，47.5%蔗糖，5%纖維素，7%酪蛋白，0.5%膽固醇，0.3%蛋氨酸，3.5%多礦，1%多維飼養大鼠，造模時間共周。

　　趙文曉[9]、王彥芳[10]、劉阿娜[11]、韓曉春[12]、趙宏偉[13]、崔寧[14]、李自輝等[1516]給予雄性大鼠高脂低蛋白飼料(在AI76A純化飼料的基礎上減少酪蛋白含量，增加豬油和膽固醇配制而成，成分為蔗糖47.5%，氯化膽堿0.2%，纖維素5%，蛋氨酸0.3%，酪蛋白7%，淀粉15%，玉米油5%，多礦3.5%，豬油15%，多維1%，膽固醇0.5%)喂養，每日以10%體質量進行尾部負重游泳(水溫15～20℃，水深40～45cm[15,16])，大鼠鼻尖沒入水中10s以上即判斷為力竭，停止游泳，造模時間共周，成功構建了脾虛水濕不化模型。

　　1.1.3痰濕證

　　張春仁[17]通過喂養小鼠60%高脂飼料和30%糖水成功構建了內濕因素誘導的痰濕證小鼠模型，其造模周期為三個月。周游等[18]每日給予小鼠高脂飼料(具體配方為：50%基礎飼料、10%雞蛋、%香油、20%豬油、%奶粉、白砂糖%、花生%、鹽%)食用構建了痰濕證小鼠模型，造模時間共64天。

　　喻松仁等[19]通過給予大鼠高脂飼料喂養周后成功構建了痰濕證模型，其高脂飼料是在100g基礎飼料中加入全脂奶粉和豬油各15g、并加入10g蛋黃粉、0.5g豬膽鹽及適量濃縮魚肝油配制而成。姜凌宇[20]、姜月華[21]等通過給予大鼠配制好的高脂飼料亦成功構建了痰濕壅盛的大鼠模型，其高脂飼料中含有12%豬油、1%麻油、5%花生粉、10%雞蛋、5%奶粉、5%蔗糖及2%食鹽，此研究中痰濕壅盛證的大鼠模型造模時間為24周。楊海燕等[2223]的研究通過給大鼠喂養高脂飼料周成功構建了痰濕證動物模型，其所用高脂飼料含15%豬油、10%蛋黃粉、15%全脂奶粉和0.5%豬膽鹽。

　　1.1.4濕熱證

　　王見文等[24]通過內外因素誘導構建了脾虛濕熱證小鼠模型，其具體構建方法為：以80%基礎飼料、12%豬油、8%蜂蜜配制形成實驗中所需的高脂高糖飼料，每日喂養小鼠以高脂飼料，連續誘導周后予小鼠以0.3mL/只的劑量H.pylori菌液灌胃，每次間隔時間為48小時，灌胃感染次后定值周，總共造模時間12周。

　　1.2外濕證動物模型

　　榮光莉等[25]等通過外濕因素誘導了小鼠濕熱證模型，研究人員通過利用人工氣候箱聯合超聲波加濕器來控制造模因素溫度和相對濕度，白天12小時將溫度設定為，夜間將溫度設定為(33±2)℃、相對濕度設置為85%，夜間12小時將將溫度設定為(20±2)℃、相對濕度設置為60%，造模時間持續14天。周欣云等[26]將小鼠每日飼養于溫度設置為(21±1)℃相對濕度設置為(90±5)的高濕環境中12h并予小鼠無卵蛋白飼料喂養，其余時間將小鼠飼養在正常環境中，從第15天起每日將小鼠置于密閉容器中并用生理鹽水霧化激發60分鐘,造模時間共21天。

　　謝俏俏等[27]構建了寒濕證大鼠模型，具體操作方法為：每日上午12時至下午時將大鼠置于明暗周期為12h/12h的人工氣候室寒濕環境飼養，人工氣候室中溫度設置為(4±0.5)℃、濕度設置為(90±2，其余時間在溫度為18～22℃，相對濕度為50～60%的常規環境飼養，造模時間共21天。陳燕等[2829]每日給予小鼠0.1mg/kg皮下注射利血平，連續誘導14天后構建了外濕因素誘導的脾虛證模型。賴鵬華等[30]將小鼠放置于溫度設置為(33±0.5)℃、相對濕度設置為(95±5)%的人工氣候箱中天構建了濕熱證小鼠模型。

　　2濕證模型檢測指標及其意義

　　隨著現代科技的發展，對于模型的構建及評價也越來越多采用現代生物學指標包括蛋白、基因等水平上的評價。使模型的構建更加客觀化、指標化及標準化，促進中醫證候模型的發展。目前已有多個指標能反映動物模型的部分特征，判定模型是否準確及成功。相關的檢測指標包括：細胞因子及相關蛋白等。

　　3小結

　　目前濕證動物模型多采用Balb、C57BL/6小鼠和Wister大鼠等不同品系作為主要的研究動物，造模方法大體可分為外濕因素、內濕因素以及內外濕因素聯合應用造模。對于外濕因素多數研究采用人工氣候箱模擬外濕環境，從文獻綜述可知其溫度、相對濕度及放置時間的條件差異較大。對于內濕因素而言，多數研究采用改變模型動物飲食結構來構建內濕證模型，如通過提供自行配制或定制的高脂高糖或高蛋白飼料、含糖或含蜂蜜的飲用水飼養而構建內濕證模型，不同條件方法差異較大。筆者認為基于臨床中醫證候本身的復雜性內外濕因素綜合造模是比較合適的濕證動物模型，具體的實驗條件還需進一步的實驗驗證。

　　4討論

　　濕證動物模型因涉及多因素，多指標及指標檢測可重復性較差，其次各個造模因素如外濕因素溫度、相對濕度、誘導時間、內濕造模因素飼料的具體配比等無統一標準，后期研究應在前人研究的基礎上通過進一步實驗摸索，比較各指標、條件差異結合臨床癥狀予以確定。

　　現階段中醫證候動物模型尚未成熟，需要不斷完善。而且濕證動物模型并無規范統一的評價標準，從上述研究各項檢測指標可以發現濕邪致病幾乎涉及人體所有系統，這與濕邪致病范圍廣的致病特點相符，正如書中所載“夫濕乃重濁之邪,其傷人最廣”(陸子賢《六因條辨》)，今后應不斷探索在前期工作基礎上進一步深入研究探索出規范的造模條件以及能客觀反映濕證的特異性生物學指標，以期能夠服務于臨床，為證候診斷以及臨床中治療方法的評價提供參考。

　　參考文獻

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　　[5]趙文曉,崔寧,季旭明等.黃芪及其拆分組分對脾虛水濕不化大鼠礦物質吸收相關基因表達譜的影響[J].中華中醫藥雜志,2017,32(11):50645067.

　　[6]劉嘉琪,王秋紅,匡海學.防己與茯苓配伍對脾虛水濕不化模型大鼠的影響[J].中華中醫藥雜志,2017,32(10):44004403.

　　作者：吳清，莫秀梅，陳達燦，晏烽根

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