HPLC法測定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的含量

　　建立了一種高效液相色譜法(HPLC)測定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉含量的檢測方法。方法以體積比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長245nm，進樣體積10µL。結果顯示鄰苯基苯酚鈉的保留時間為7min左右，線性范圍5~100µg/mL,方法的最低檢出質量比為2.5mg/kg，最低定量質量比為8.5mg/kg，平均回收率為96.07%~107.06%，精密度(RSD)為0.24%~0.75%。該方法樣品處理快速簡便，分析方法準確可靠，適用于消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉含量的測定。

　　關鍵詞：高效液相色譜法消毒洗手液鄰苯基苯酚鈉

　　鄰苯基苯酚鈉與鄰苯基苯酚均為高效低毒的廣譜殺菌劑，具有殺菌、抑霉的作用，在消毒洗手液中作為殺菌的有效成分。含有鄰苯基苯酚鈉的消毒洗手液可有效殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌以及醫院感染常見細菌及病毒[1-3]。但一些動物試驗表明，鄰苯基苯酚鈉是一種潛在的致癌物質，對腎臟會產生毒副作用，亦可能會對視覺系統造成潛在的損害。2017年，鄰苯基苯酚被世界衛生組織國際癌癥研究機構列入3類致癌物清單中。2018年4月24日，歐盟發布通報，修訂化妝品法規(EC1223/2009)，擬禁止使用鄰苯基苯酚鈉、鄰苯基苯酚鉀和鄰苯基苯酚乙醇胺鹽作為防腐劑用于化妝品中。我國《化妝品安全技術規范》(2015年版)中規定，鄰苯基苯酚及鹽類在化妝品中的使用限量為2mg/g[4]，但尚未有相關的國家標準及行業標準來監控消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的使用。

　　因此，能夠準確定量消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉可為此類消毒產品的質量監控及研發提供有效依據，建立消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的檢測方法非常有必要。目前鄰苯基苯酚的檢測方法有很多，主要有紫外分光光度法[5]、液相色譜法[1,6]、氣相色譜法[7]以及氣相色譜質譜法[8]。鄰苯基苯酚鈉的檢測方法主要有氣相色譜法[3]，目前尚未查到液相色譜法。本文建立了高效液相色譜法檢測消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的方法，方法以甲醇-磷酸溶液為流動相，以245nm為檢測波長。本方法的線性良好，具有較好的精密度和回收率，操作簡便、分離效果好、準確，可用于定性及定量分析。

　　1試驗部分

　　1.1儀器與試劑

　　儀器：高效液相色譜Waters2695、2487紫外檢測器，美國Waters公司;XS205型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;Cary100紫外分光光度計，Varian公司。試劑：鄰苯基苯酚鈉標準品，濃度83%，TCI;磷酸，色譜純，國藥集團化學試劑有限公司;甲醇，色譜純，默克股份兩合公司。流動相：甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，體積比70׃30。

　　1.2色譜條件

　　ZORBAXSB-C18柱(4.6mm×250mm×5μm);柱溫30℃;流動相A為甲醇，流動相B為磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)，采用等度洗脫程序(A相與B相體積比為70∶30)，流動相使用前經0.45μm有機濾膜過濾;流速1.0mL/min;進樣量10μL;檢測波長245nm。

　　1.3標準溶液配制

　　準確稱取0.1g(精確到0.001g)標準品，加入8mL左右的甲醇磷酸溶液，超聲，待溶解完全后轉移至100mL容量瓶中，用甲醇磷酸溶液定容，得質量濃度1000μg/mL的鄰苯基苯酚鈉標準儲備溶液。再用移液管吸取1mL10000μg/mL標準儲備液至10mL容量瓶中，用甲醇-磷酸溶液定容，得質量濃度100μg/mL的鄰苯基苯酚鈉標準儲備溶液。使用前配成質量濃度分別為0、5、10、20、40、60、80和100μg/mL的標準系列溶液。

　　1.4試樣處理

　　稱取試樣0.5g，精確至0.001g，置于25mL具塞比色管中，加入甲醇磷酸溶液20mL，渦旋60s，分散均勻，超聲提取15min，冷卻到室溫后，用甲醇磷酸溶液定容，渦旋振蕩搖勻，必要時離心分離。混液經0.45μm有機系濾膜過濾，濾液可根據需要用甲醇磷酸溶液進行稀釋，保存于2mL進樣瓶中作為待測樣液，按照設定的色譜條件測定。

　　1.5結果計算

　　鄰苯基苯酚鈉的含量按式(1)計算。ω(鄰苯基苯酚鈉)=(ρ×V)×10-4/m(1)式中：ω—樣品中鄰苯基苯酚鈉的質量分數(%)，ρ—進樣分析樣品溶液中鄰苯基苯酚鈉的質量濃度(μg/mL)，V—樣品的定容體積(mL)，m—樣品質量(g)。

　　2結果與討論

　　2.1色譜條件的優化

　　利用紫外分光光度計，在200~800nm波長范圍內全掃描。獲得鄰苯基苯酚鈉的最大吸收波長為245nm，故選擇245nm作為檢測波長。根據一些文獻報道，液相色譜檢測鄰苯基苯酚最為常用的流動相是甲醇-水、甲醇-乙腈-水，乙腈-磷酸鹽緩沖液等。本文檢測的鄰苯基苯酚鈉，相比較鄰苯基苯酚,添加磷酸調節水相的pH,以體積比70∶30的甲醇-磷酸溶液(0.25mL磷酸加入到1000mL水中)作為流動相時，鄰苯基苯酚鈉的出峰時間在7min左右。

　　2.2樣品定性分析

　　按照前述色譜條件，將不同劑型的消毒洗手液(表活型、皂基型)分別進樣，每個樣品進樣3次，記錄保留時間和峰面積。根據保留時間對樣品峰定性，標準品與樣品色譜圖，在此色譜條件下，各樣品峰峰形良好，沒有雜質峰干擾。說明本方法色譜條件適用于消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉的測定。

　　2.3線性范圍和檢出限

　　準確配制0、5、10、20、40、60、80和100mg/L共6個濃度水平的鄰苯基苯酚鈉標準溶液，進樣10µL，平行測定3次，以平均峰面積對樣品質量濃度進行線性回歸，結果見表1。由表1可知，鄰苯基苯酚鈉的質量濃度在5~100mg/L范圍內，相關系數R2>0.999，標準曲線線性擬合良好。本方法以標準曲線最低點作為最低定量限，其三分之一作為檢出限。當取樣量為0.5g，定容體積為25mL時，方法檢出限為0.0005μg，定量下限為0.0017μg。最低檢出質量比為2.5mg/kg，最低定量質量比為8.5mg/kg。

　　2.4回收率與精密度

　　向空白表活型和皂基型消毒洗手液分別添加低、中、高3種濃度水平的標準樣品，每個水平平行8份。加入鄰苯基苯酚鈉標準品后，按前述方法進行提取，測定鄰苯基苯酚鈉含量。結果顯示，低、中、高三種濃度水平下在兩種不同劑型洗手液中的回收率都很好，鄰苯基苯酚鈉在兩種劑型洗手液中的加標回收率范圍為96.07%~107.06%，方法的精密度(相對標準偏差，RSD)為0.30%~0.75%。結果表明，此方法具有很高的準確性。

　　2.5重復性試驗

　　分別在表活型洗手液和皂基型洗手液空白基料中加入鄰苯基苯酚鈉標準品，各配制一份樣品溶液，分別測得峰面積，然后根據回歸曲線峰面積與質量濃度的關系式計算鄰苯基苯酚鈉的質量濃度，重復測定6次，考察該方法的重復性，重復性試驗的RSD值分別為0.78%和0.49%，表明該法重現性良好。

　　3結論

　　本文建立了一種快速、準確的HPLC法測定消毒洗手液中鄰苯基苯酚鈉含量的方法。本方法回收率高，精確性強，檢出限低，能非常有效地對消毒洗手液中的鄰苯基苯酚鈉含量進行監控。

　　參考文獻

　　[1]趙敏,寧嘯駿,周耀斌.高效液相色譜法測定化妝品中鄰苯基苯酚的含量[J].香料香精化妝品,2010(6):25-27.

　　[2]鄭晨,余雯靜.鄰苯基苯酚檢測技術現狀[J].中國科技博覽,2010(26):32-32.

　　[3]羅嵩,張卓娜,朱英.氣相色譜法測定消毒劑中對叔戊基苯酚鈉、鄰苯基苯酚鈉、鄰芐基對氯苯酚鈉的含量[J].中國消毒學雜志,2016,33(6):517-520.

　　[4]張卓娜,林少彬,楊艷偉.高效液相色譜法同時測定化妝品中5種防腐劑[J].日用化學工業,2017,47(7):418-420.

　　[5]陳迪,劉楠囡,林雯,等.紫外分光光度計法測定茶葉中鄰苯基苯酚的含量[J].福建茶葉,2017(12):5-6

　　醫學護理論文投稿刊物：《中國消毒學雜志》注重科學性、實用性，旨在推廣科研成果，交流工作經驗，促進技術改革，發展消毒事業。以多種方式介紹國內外有關消毒與滅菌的科研成果、工作經驗和理論知識。適合于廣大衛生防疫人員和高、中級醫護人員閱讀，亦可作為從事科研、教學、食品、制藥、獸醫等工作人員的參考讀物。

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