本文摘要：農(nóng)藝師職稱論文范文主要探索食用菌中呋喃丹農(nóng)藥殘留，采用全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯(lián)用系統(tǒng)處理樣品，可以有效去除大部分色素及干擾物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本方法具有凈化效果好、檢測限低、操作簡單、實(shí)用等特點(diǎn)，有效避免有機(jī)污染，可用于市場常見食用菌的呋
農(nóng)藝師職稱論文范文主要探索食用菌中呋喃丹農(nóng)藥殘留，采用全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯(lián)用系統(tǒng)處理樣品，可以有效去除大部分色素及干擾物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本方法具有凈化效果好、檢測限低、操作簡單、實(shí)用等特點(diǎn)，有效避免有機(jī)污染，可用于市場常見食用菌的呋喃丹農(nóng)藥殘留量的測定研究，適用于基層單位開展呋喃丹的監(jiān)測分析，具有廣泛的應(yīng)用前景。
《農(nóng)藥》主要報(bào)道農(nóng)藥科研、生產(chǎn)、加工、分析、應(yīng)用等方面的新成果、新技術(shù)、新知識、新動態(tài)、新經(jīng)驗(yàn)，農(nóng)藥生產(chǎn)過程的三廢治理及副產(chǎn)物的綜合利用、國內(nèi)外農(nóng)藥新品種、新劑型和新用法、國內(nèi)病蟲草害發(fā)生趨勢，農(nóng)藥藥效試驗(yàn)、田間應(yīng)用、使用技術(shù)改進(jìn)及毒性、作用機(jī)制、殘留動態(tài)等內(nèi)容。
建立了凝膠滲透色譜凈化高效液相色譜法檢測食用菌類中呋喃丹農(nóng)藥殘留量的方法。樣品經(jīng)乙腈提取，氮?dú)獯蹈桑h(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，V/V)溶液溶解后，凝膠滲透色譜進(jìn)行凈化，C18反相高效液相色譜柱分離后，采用液相色譜熒光檢測器進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。農(nóng)藝師職稱論文范文呋喃丹在0.2～5.0ng/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r大于0.999，測定低限為0.01mg/kg。對空白食用菌樣品進(jìn)行3個(gè)濃度水平0.5、1.0和2.0mg/kg的加標(biāo)回收試驗(yàn)，呋喃丹的加標(biāo)回收率為78.3%～97.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.26%～11.69%。本實(shí)驗(yàn)所建立的方法簡單，靈敏度高，適用于食用菌樣品中的呋喃丹農(nóng)藥殘留的分析檢測。
關(guān)鍵詞：
高效液相色譜;食用菌;呋喃丹;凝膠滲透色譜
1引言
呋哺丹屬于氨基甲酸酯類農(nóng)藥，是一類應(yīng)用廣泛的殺蟲、殺螨、除草劑，由于其具有高效、殘留期短的優(yōu)點(diǎn)，在食用菌種植中廣泛應(yīng)用[1]。目前國內(nèi)外對該類農(nóng)藥殘留有很嚴(yán)格的要求，食用菌中最低為0.1mg/kg[2]。因此，建立食用菌中快速、準(zhǔn)確、簡便、靈敏度高的呋喃丹殘留檢測方法十分必要。在氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析中，樣品凈化有GPC凈化[3-6]、SPE凈化[7-11]及傳統(tǒng)的液-液分配[12-14]和柱層析法[15]。GPC凈化具有結(jié)果重現(xiàn)性好、凈化效率高等優(yōu)點(diǎn)，為提高工作效率，節(jié)省人力，目前越來越多的檢測機(jī)構(gòu)選擇采用GPC凈化等新型凈化方式取代傳統(tǒng)的液-液分配和柱層析法。農(nóng)藝師職稱論文范文但目前各標(biāo)準(zhǔn)中的GPC凈化均為離線GPC，即在樣品萃取后，需要實(shí)驗(yàn)人員手動轉(zhuǎn)移，凈化、濃縮等一系列操作后，轉(zhuǎn)移至GC/MS進(jìn)行分析。采用全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯(lián)用系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)GPC和濃縮同時(shí)進(jìn)行，自動化操作，簡化操作步驟，避免有機(jī)污染[16]。本實(shí)驗(yàn)選擇8種有代表性的蔬菜為研究基質(zhì)，建立了GPC凈化、高效液相色譜檢測的測定方法，方法簡便快速、凈化效果好，可滿足食用菌中呋喃丹殘留的檢測要求。
2材料與方法
2.1儀器與試劑
HPLC-1260液相色譜儀(美國安捷倫公司)配熒光檢測器(G1321B);全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯(lián)用系統(tǒng)(美國J2Scientific公司);氮吹儀(英國TECHENE公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國Heidolph公司);渦旋混勻器(美國ScientificIndustries公司);食品粉碎機(jī)(中國歐科電器公司)。農(nóng)藝師職稱論文范文呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)溶液：100μg/mL，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。乙腈、甲醇(色譜純，Merck公司);環(huán)己烷、乙酸乙酯(分析純，國藥集團(tuán));無水硫酸鈉(分析純，上海久億化學(xué)試劑有限公司);0.22μm有機(jī)系濾膜(天津東康科技有限公司);實(shí)驗(yàn)室用水為Millipore超純水。
2.2試驗(yàn)方法
2.2.1溶液配制
呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確移取100μL的呋喃丹農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇做溶劑，配制成10μg/mL儲備液，-20℃保存。使用時(shí)根據(jù)呋喃丹對應(yīng)響應(yīng)值，吸取適量儲備液，用甲醇配制成濃度為0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測定。乙酸乙酯-環(huán)己烷(1∶1，V/V)：取500mL乙酸乙酯，加入環(huán)己烷500mL混勻。
2.2.2樣品處理
①試樣制備采集有代表性的8種食用菌樣品，取可食部分，經(jīng)縮分后，切碎，充分混勻后放入食品粉碎機(jī)粉碎，制成待測樣品。分裝后置于-20℃下保存，待提取。②提取稱取25.00g(精確到0.01g)粉碎的食用菌樣品，加入50mL乙腈，高速勻漿2min后用濾紙過濾。農(nóng)藝師職稱論文范文濾液收集到裝有5～7g氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液40～50mL，蓋上塞子。劇烈振蕩lmin，在室溫下靜置10min，使乙腈相和水相分層。吸取10mL乙腈溶液在80℃水浴中氮吹干。加10mL已配好的乙酸乙酯-環(huán)己烷(50+50)溶解殘?jiān)?jīng)無水硫酸鈉脫水，待GPC凈化。③凈化GPC凈化條件：流動相乙酸乙酯-環(huán)己烷(50+50，V/V)，流速為4.6mL/min，選擇性收集10～20min流出液，經(jīng)GPC在線濃縮，最后用2.0mL甲醇-水(體積比5∶5)溶解殘?jiān)占吝M(jìn)樣瓶，過0.22μm有機(jī)濾膜，待測。
2.2.3色譜參考條件
色譜柱：C18(安捷倫，4.6mm×25cm，5μm);C18預(yù)柱(4.6mm×4.5cm)。柱溫：35℃。激發(fā)波長285nm;發(fā)射波長320nm。流動相：甲醇-水(1∶1，V/V)。
3結(jié)果與分析
3.1色譜條件優(yōu)化
3.1.1流動相的選擇
有實(shí)驗(yàn)研究采用乙腈-水作為流動相，但乙腈毒性較高，對色譜柱損傷大。本實(shí)驗(yàn)以甲醇-水為流動相，以甲醇與水混合溶液的體積比(分別為30∶70、40∶60、50∶50)為條件進(jìn)行測試，甲醇比例較低時(shí)，保留時(shí)間延長，峰面積減小，結(jié)果表明甲醇-水體積比為50∶50時(shí)，樣品的出峰時(shí)間、峰形、靈敏度較適宜，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1。
3.1.2檢測波長選擇
取呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)使用液在2.2.3條件下進(jìn)樣，在波長200～900范圍內(nèi)對呋喃丹進(jìn)行多發(fā)射和多激發(fā)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)呋喃丹在激發(fā)波長320nm和發(fā)射波長為285nm處最強(qiáng)。故方法選定320nm為發(fā)射波長，285nm為激發(fā)波長。
3.1.3柱溫的選擇
研究中固定其他色譜條件，將色譜柱溫度從20℃升至40℃，結(jié)果顯示呋喃丹保留時(shí)間逐漸提前，為有效確保柱效及色譜柱使用壽命，方法采取柱溫35℃。
3.2GPC條件優(yōu)化
本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用GPC作為無損的半自動凈化方法，選用Bio-BeadsS-X3(300mm×10mm)作為填料。選用體積比為1∶1的乙酸乙酯-環(huán)己烷為流動相，設(shè)定流速為4.6mL/min，分段采集。實(shí)驗(yàn)中，為確定呋喃丹收集步驟，采用加標(biāo)樣品通過GPC紫外檢測器，紫外掃描數(shù)據(jù)顯示目標(biāo)化合物集中在9min至13min，故收集此段時(shí)間內(nèi)提取液(圖2)。實(shí)驗(yàn)中采用草菇樣品加標(biāo)樣品經(jīng)GPC凈化，檢測結(jié)果顯示，經(jīng)GPC凈化后雜質(zhì)干擾成分明顯減少，目標(biāo)化合物檢測靈敏度提高，同樣其他食用菌樣品也能得到較好的凈化效果。以草菇為例，見圖3、圖4。
3.3線性關(guān)系及檢測
限呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)工作液系列，按方法的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣，以所得峰面積A對濃度C(μg/mL)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果表明在0.2～5.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍內(nèi)，呋喃丹濃度與響應(yīng)值有良好的線性關(guān)系(圖4)，其回歸方程為：Y=6.179X-0.2884;相關(guān)系數(shù)r=0.9993。農(nóng)藝師職稱論文范文根據(jù)色譜響應(yīng)值S/N≥3標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算，呋喃丹最低檢出濃度為0.01mg/kg。
3.4精密度實(shí)驗(yàn)
以呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0μg/mL，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測得呋喃丹平均峰面積為30.96，RSD為0.108%。
3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
以標(biāo)準(zhǔn)溶液5.0μg/mL，每隔2h進(jìn)樣，每次10μL，測得呋喃丹平均峰面積為30.81，RSD為0.131%。結(jié)果表明：供試品溶液在12h內(nèi)所測得的結(jié)果基本一致。
3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
取同一加標(biāo)食用菌樣品6份，按2.2.2的方法制成供試溶液。在上述色譜條件下，測定呋喃丹平均含量為1.78μg/kg，RSD為1.58%。
3.7方法回收率實(shí)驗(yàn)
精密稱取陰性樣品進(jìn)行低濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。該陰性樣品中加標(biāo)0.50、1.00、2.00μg/kg，回收率在78.3%～97.6%之間，RSD在3.26%～11.69%之間。
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